HBSS 和 EBSS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平，在 Eagleˊs （2.2 g/L）中比在 Hank’s （0.35 g/L） 中高。碳酸氢钠需用培养环境中高浓度的 CO2 平衡，以维持溶液的 pH 值。Eagleˊs 液在空气水平的 CO2 中，溶液会变碱，Hank’s 液在 CO2 培养箱中会变酸。如果希望在 CO2 培养箱中保存组织，需要用 Eagleˊ s液，如果用 Hank’s 溶液，则需拧紧瓶口，仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用 Hank’s 液就可以了。
丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。
当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查 HEPA 过滤器是否穿透。
高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素 B 和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。
1.在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。
2.分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素 B 推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0，8.0 mg/mL。
3.每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。
4.确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度 2～3 倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2～3 代。
5.在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
6.重复步骤 4。
7.在无抗生素的培养基中培养 4～6 代，确定污染是否以已被消除。
酚红在培养基中被用来作为 pH 值的指示剂：中性时为红色，酸性（pH < 7.0）时为黄色，碱性（pH > 7.6）时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。
如何用台盼兰计数活细胞？
用无血清培养基把细胞悬液稀释到 200～2000 个/毫升，在 0.1 毫升的细胞悬液中加入0.1 毫升的 0.4％ 的台盼兰溶液。轻轻混匀，快速用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞，但操作时间过长，台盼兰对细胞有毒性，会影响计数结果。
不同的酚红浓度对培养基颜色也有一定的影响，一般含低浓度酚红（c < 10 mg/L）的培养基（如 DMEM/F12，RPMI 1640）pH = 7.2 时，肉眼识别为黄色，导致很多客户认为培养基 pH 偏酸。
L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性，一般用 L-丙氨酰-谷氨酰胺（L-Ala-Glutamine，GlutaMAX™-I) 二肽代替，可以减少氨的形成。
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。
视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。
培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在 MEM 中培养的细胞，很可能在 DMEM 或M199 中同样很容易生长。总之，首选 MEM 做粘附细胞培养、RPMI-1640 做悬浮细胞培养是一个好的开始，各种目的无血清培养最好首选 DMEM/F12 培养基或者 IMDM 含血清替代物。
